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單片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

單片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

簡要描述:
單片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)
用途
單個(gè)短、長片段無縫克隆。插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一,無需純化,可直接與載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

更新時(shí)間:2025-01-13

訪問量:102

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:

單片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

產(chǎn)品介紹:

1. 產(chǎn)品描述:

信勵(lì)致和®單片段無縫克隆試劑盒基于DNA序列同源性進(jìn)行片段重組,可快速將單個(gè)片段定向克隆到任意線性化載體中。本試劑盒含有的2×單片段無縫克隆混合液可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3' 端進(jìn)行重組連接,最終得到的無缺口閉環(huán)質(zhì)??芍苯愚D(zhuǎn)化,完成定向克隆。該試劑盒克服了酶切位點(diǎn)的限制,僅需在插入片段PCR引物5' 端引入線性化載體的末端序列,使得插入片段5' 端和3' 端帶有線性化載體兩端一致的序列(15~25 bp),即可實(shí)現(xiàn)插入片段的定向重組。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進(jìn)行(50 ℃處理15 min),配合靈活的PCR 產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法,數(shù)小時(shí)內(nèi)即可完成從DNA樣品準(zhǔn)備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。

 

2. 產(chǎn)品特點(diǎn):

(1)無需考慮酶切位點(diǎn),基于序列同源性反應(yīng)15 min即可實(shí)現(xiàn)載體與片段的快速重組。

(2)插入片段的PCR產(chǎn)物正確且單一,無需純化,可直接與載體進(jìn)行重組反應(yīng)。

(3)可以選擇性進(jìn)行 5 min快速轉(zhuǎn)化 E.coli 感受態(tài)細(xì)胞。


單片段無縫克隆試劑盒(克隆突變)

使用說明:

1. 產(chǎn)品組分:

組分/含量

AB0141

AB0142

2×單片段無縫克隆混合液

250 μL

500 μL

500 bp平末端對照片段(20ng/μL)

5 μL

5 μL

pUC19線性化載體(50 ng/uL)

5 μL

5 μL

 

2. 儲(chǔ)運(yùn)條件:

-25~-15℃存儲(chǔ),有效期12個(gè)月,干冰運(yùn)輸。

 

3. 注意事項(xiàng):

(1)片段擴(kuò)增用模板、引物、線性化載體、高保真聚合酶、感受態(tài)細(xì)胞、ddH2O需要自備。

(2)重組產(chǎn)物冰上冷卻后,可直接轉(zhuǎn)化化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí),重組產(chǎn)物轉(zhuǎn)化體積最多不應(yīng)超過所用感受態(tài)細(xì)胞體積的1/10。

(3)純化或回收的載體或目的片段品質(zhì)較差會(huì)顯著降低克隆陽性率。

(4)菌落少時(shí),建議轉(zhuǎn)化時(shí)適當(dāng)增加重組產(chǎn)物的量,或者增加菌液涂布量。

(5)隨著重組質(zhì)粒長度的增加,克隆效率降低。


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