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    細胞培養(yǎng)過程中如何避免微生物污染?

    發(fā)布時間: 2024-03-20  點擊次數(shù): 721次

    細胞培養(yǎng)過程中常見的可造成污染的微生物包括細菌、真菌、支原體、酵母等,不論是哪種污染,均會造成細胞生長變慢、培養(yǎng)基渾濁、細胞變形等不利于細胞生長的現(xiàn)象,更有甚者可能會出現(xiàn)污染同細胞箱內(nèi)別的細胞的現(xiàn)象,因此,細胞培養(yǎng)過程中應(yīng)樹立嚴格的無菌意識,盡量避免造成細胞污染。


    準備處理細胞前,有如下幾點注意事項:

    1. 細胞培養(yǎng)應(yīng)在細胞房內(nèi)進行,同時細胞房應(yīng)保證環(huán)境狀況良好,空氣干燥。


    2. 進入細胞房前應(yīng)在緩沖間穿戴細胞房專用隔離衣、專用拖鞋,戴好一次性口罩及手套。


    3.細胞房應(yīng)配置75%酒精噴壺,打開細胞培養(yǎng)箱前應(yīng)使用75%酒精全面消毒雙手,同時對細胞培養(yǎng)箱外側(cè)進行消毒。

    4.細胞操作過程中所使用的耗材如槍頭、Ep管、凍存管、離心管等均要求無菌,使用到的儀器如離心機、移液器、水浴鍋等均為細胞房專用儀器。

    5.處理細胞等一系列操作均應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進行。

    6.細胞培養(yǎng)箱內(nèi)應(yīng)加入硫酸銅溶液,防止細胞污染,同時,每天處理細胞的同時注意觀察CO2罐的容量,若不足及時更換。

    開始處理細胞到結(jié)束的過程是細胞最容易出現(xiàn)污染的環(huán)節(jié),因此需格外注意操作,注意事項如下:

    1.開始操作前,生物安全柜內(nèi)放入需要的物品,開啟紫外燈消毒30min。

    2.消毒結(jié)束后,用75%酒精浸泡的棉球或紗布擦拭臺面,后面所有放入生物安全柜內(nèi)的物品均需酒精噴灑消毒。

    3.對于一般的細胞來說,正常培養(yǎng)的過程中均應(yīng)在培養(yǎng)基中按比例加入青霉素鏈霉素雙抗,防止細胞出現(xiàn)細菌污染。

    4.在處理細胞的過程中,小心操作,移液器槍頭不能碰到生物安全柜內(nèi)任何物品,若有碰到應(yīng)及時更換,同時,吸取不同液體時注意及時更換槍頭,防止出現(xiàn)交叉污染。

    5.所有培養(yǎng)基配置完成后建議分裝使用,每次實驗結(jié)束后剩余培養(yǎng)基、胰酶等均用封口膜進行封口。

    6.處理細胞完成后,使用75%酒精浸泡的紗布仔細擦拭臺面,最后開啟紫外燈消毒。

    7.在所有人結(jié)束細胞實驗后,細胞房內(nèi)應(yīng)嚴格消毒,將84消毒液或新潔爾滅稀釋后擦拭桌面,再用專用拖把拖地,最后開啟紫外燈消毒。

    細胞操作整個過程較為簡單,但操作需要注意很多細節(jié),細胞污染可能避無可避,一旦出現(xiàn)了細胞污染,建議盡早扔掉細胞并對培養(yǎng)箱進行消毒。

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