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    細(xì)胞爬片免疫組化染色實(shí)驗(yàn)步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2024-01-22  點(diǎn)擊次數(shù): 905次

    原理:

    免疫組織化學(xué)技術(shù):檢測(cè)組織原位表達(dá)的肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等抗原性物質(zhì)。


    (一)組織和細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備

    1. 組織標(biāo)本的取材-取材新鮮,固定及時(shí),形態(tài)完好。


    2. 細(xì)胞標(biāo)本的準(zhǔn)備

    (1)活體細(xì)胞標(biāo)本:印片法、穿刺吸取法、沉淀法


    (2)培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本:

    細(xì)胞涂片: 將細(xì)胞制成懸液(10^6)涂在 涂有切片粘合劑的載玻片上,晾干后固定(細(xì)胞甩片)。

    ②細(xì)胞爬片: 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在蓋玻片上 將細(xì)胞直接培養(yǎng)在6孔或9孔板上。

    3.固定

    (1)保持形態(tài):終止和抑制外源性和內(nèi)源性酶活性,防止 組織細(xì)胞的死后變化,防止自溶和腐敗,保持組織細(xì)胞的固有形態(tài)。

    (2)保存抗原使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖和酶等各種抗原成份轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì),以保持它原有的結(jié)構(gòu)和定位與生活時(shí)相仿。

    (3)硬化作用:固定劑兼有硬化作用、使組織硬化、增加組織硬度、便于制片。

    (4)便于觀察:使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來(lái)而產(chǎn)生不同的折射率,造成光學(xué)差異,以便染色后易于鑒別和觀察;經(jīng)過(guò)固定的組織能對(duì)染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰,便于辨認(rèn)。

    注意事項(xiàng):

    ①防止脫片:玻片預(yù)處理(多聚賴氨酸)、溫和操作。

    ②力求保持組織新鮮, 勿使其干燥, 盡快固定處理。

    ③組織塊不易過(guò)大過(guò)厚,必須小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm,尤其是組織塊厚度須保持在0.3cm 以內(nèi)。

    ④固定劑必須有足夠的量,在體積上一般大于組織20倍。

    ⑤組織固定后, 應(yīng)充分水洗,去除固定劑,以減少固定劑造成的人為假像。

    (三)細(xì)胞爬片的免疫組化染色

    1. 取出細(xì)胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20 ~30 分鐘。

    2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。

    3. 打孔液浸泡 5 分鐘。

    4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,2 次。

    5. 后接前述實(shí)驗(yàn)步驟的第 6 步(正常血清封閉)。

    注:第 3、4 步僅用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原,檢測(cè)細(xì)胞膜抗原時(shí)不用。

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