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    ibidi 載玻片|優(yōu)化活細胞培養(yǎng)

    發(fā)布時間: 2024-01-18  點擊次數(shù): 830次

    簡介:

    免疫熒光技術(shù)是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。傳統(tǒng)實驗方法用小玻片,先泡酸、再晾干、再 coating、再種細胞、染色、封片成像。

    本文章使用新方法,我們將描述在通道載玻片內(nèi)培養(yǎng)大鼠成纖維細胞(Rat1)的單個實驗案例。然后,我們用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細胞骨架,并用DAPI對細胞核進行復(fù)染。

    實驗步驟:

    培養(yǎng),固定,染色,成像


    培養(yǎng):


    1.在無菌條件下打開ibidi μ-Slide并將其放在μ-Slide架(80003)上。將Rat1細胞懸浮液加入通道中。

    2.用提供的蓋子輕輕地蓋住儲液器??梢圆糠株P(guān)閉它們。


    3.將架子放入培養(yǎng)箱(37°C; 5%CO2)中,讓細胞附著(60分鐘)。然后用無細胞培養(yǎng)基填充兩個儲庫。


    4.培養(yǎng)過夜。


    固定細胞:

    1.通過使用細胞培養(yǎng)抽吸裝置或移液管從儲庫中吸出整個培養(yǎng)基。用Dulbecco's PBS洗滌細胞,緩慢地將液體施加到一個空的儲液器中,并從對面的儲液器中吸出。

    2.通過在PBS中使用3.7%多聚甲醛以相同的方法固定細胞。從通道的另一側(cè)移除儲液器的液體并等待10分鐘。

    洗滌封閉:

    1.用PBS洗滌細胞。

    2.在PBS中使用0.1%Triton®X-100溶液通透3-5分鐘。


    3.在PBS溶液中施加μl的1%BSA 溶液封閉20分鐘。


    4.用PBS洗滌細胞


    染色鏡檢

    1.從通道中清除所有液體。從通道中吸出液體后,不要讓通道干燥。

    2.用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽(1Unit+500μl PBS+ 1%BSA,InvitrogenCorp.)在室溫下培養(yǎng)20分鐘。

    3.用PBS洗滌細胞并清空通道。


    4.施用DAPI(0.1μg/ ml,Sigma-Aldrich)3-5分鐘。


    5.用PBS洗滌細胞并除去所有液體。用滴管瓶注入 Ibidi封片油。用提供的蓋子蓋住儲液器。μ-Slide可以存儲大約4周。


    6.在熒光顯微鏡下選擇適當(dāng)?shù)臑V鏡,也可以使用浸油觀察細胞。



    優(yōu)點:

    1.高分辨率成像

      ibidi載玻片非常適合寬場熒光、共焦成像、FRAP、FRET、FLIM和相差成像。

    2.操作快速、簡單

      一體式腔室簡化了您的免疫熒光實驗流程。

    3.經(jīng)濟高效的實驗

      僅需少量細胞和少量試劑。

      深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。






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