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    染料攝取法測(cè)定細(xì)胞生存力實(shí)驗(yàn)

    發(fā)布時(shí)間: 2022-12-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1088次

    原理

    細(xì)胞懸液用碘化丙啶和二乙酰熒光素的混合液染色,用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

    材料與儀器


    步驟


    材料

    無(wú)菌

    單細(xì)胞懸液
    雙醋酸熒光素,10ug/ml,溶于 HBSS
    碘化丙啶,500ug/ml

    非滅菌

    熒光顯微鏡
    濾光片
    熒光素:激發(fā) 450/590 nm ,發(fā)射 LP 515 nm
    碘化丙啶:激發(fā) 488nm ,發(fā)射 615 nm

    操作步驟

    1. 細(xì)胞懸液的制備與染料排斥法相同(見(jiàn)方案 22.1),但是生長(zhǎng)液中不含酚紅。
    2. 以 1 : 10 的比例加入熒光素染料混合液,二乙酰熒光素的終濃度為 l ug/ml,碘化丙啶的終濃度為 50ug/ml。 :
    3. 將細(xì)胞置于 37°C , 溫育 10 min。
    4. 將一滴細(xì)胞滴在載玻片上,蓋上蓋玻片,用熒光顯微鏡觀察。


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