色噜噜久久综合伊人超碰,国产精品99久久免费观看,国产美女视频黄A片免费观看软件

技術(shù)文章ARTICLE

您當前的位置：首頁 > 技術(shù)文章 > 瓊脂中克隆培養(yǎng)

瓊脂中克隆培養(yǎng)

發(fā)布時間： 2022-12-13　　點擊次數(shù)： 1155次

原理
溫度高時瓊脂呈液態(tài)，但在37℃ 時成凝膠狀態(tài)，細胞懸浮在溫暖的瓊脂凝膠培養(yǎng)基中，待瓊脂形成凝膠后進行培養(yǎng)，形成散在集落，很容易分離。
材料與儀器
Noble瓊脂 Difco 胎牛血清
兩倍濃度培養(yǎng)基生長培養(yǎng)基無菌超純水無菌錐形瓶吸管通用容器培養(yǎng)皿水浴三角瓶托盤電子細胞計數(shù)儀本生煤氣噴燈
步驟
1. 在培養(yǎng)皿底皿側(cè)面編號或做好標記，將培養(yǎng)皿放在托盤中，很方便。

2. 準備含 40 % FBS 的 2× 培養(yǎng)基（即 Ham’SF12、RPMI1640、DMEM 或 CMRL1066。用 10×培養(yǎng)基配 2× 培養(yǎng)基，取半量所需終液量，加兩倍濃度的血清），保持 37℃。

3. 稱取 1.2 g 瓊脂。

4. 分別在無菌錐形瓶和另一個無菌瓶中加 100 ml 無菌 UPW。將 1.2 g 瓊脂放人錐形瓶中，蓋好，煮沸 2 min 。另一種方法是，提前高溫滅菌瓊脂。但若已保存起來，使用時仍需煮沸溶解或微波爐融化備用。

5. 將煮沸過的瓊脂和有 UPW 的瓶放到 55°C 水浴中。

6. 2× 培養(yǎng)基和 1.2 % 瓊脂等量混合制備 0.6 % 瓊脂底層，保持 37°C 。如果需要任何的生長因子、激素或其他添加物，應(yīng)在此時添加至底層瓊脂培養(yǎng)基（生長培養(yǎng)基，1×，用于細胞稀釋）內(nèi)。

7. 在培養(yǎng)皿中加人 1 ml 0.6 % 的瓊脂培養(yǎng)基，晃勻，確保培養(yǎng)基覆蓋整個培養(yǎng)皿底。置于室溫定型。

8. 制備細胞懸液，計數(shù)。

9. 準備 0.3% 瓊脂培養(yǎng)基，保持 37°C 。此培養(yǎng)基可以用 37°C 的 2× 培養(yǎng)基、55°C 的 1.2 % 瓊脂和 55°C 的 UPW 以 2:1:1 的比例混合制備。

10. 制備以下稀釋濃度的細胞，使細胞的最大濃度為 1×105 /ml。

(a)1×105 /ml

(b)將 1×105 /ml 稀釋 3 倍成 3.3×104 /ml

(c)將 3.3×104 /ml 稀釋 3 倍成 1.1×104 /ml

(d)將 1.1×104 /ml 稀釋 3 倍成 3.7×103 /ml

11. 將四種稀釋液的濃度分別標在 4 個小玻璃瓶或試管上，從每種稀釋液中吸出 40 μl，包括 1×105 /ml 細胞液，分別放入相應(yīng)容器內(nèi) 37°C 加 4 ml 0.3% 瓊脂培養(yǎng)基，混勻，再從每個容器（通用容器，小玻璃瓶或離心管，稀釋細胞用）中吸出 3 個 1 ml 分別加在相應(yīng)的三個培養(yǎng)皿上。最終濃度如下：

(a)1×103 /ml/皿

(b)330 /ml/皿

(c)110 /ml/皿

(d)37 /ml/皿

加細胞之前，確保上層瓊脂培養(yǎng)基有足夠的時間冷卻至 37°C 。

12. 待培養(yǎng)皿中的溶液在室溫下形成凝膠狀態(tài)。

13. 將培養(yǎng)皿放置在一個帶蓋的清潔塑料盒中，37°C 加濕溫箱中培養(yǎng) 10 天。
注意事項
準備培養(yǎng)基和細胞之前，先算出細胞稀釋度，在培養(yǎng)皿上做好標記，檢測一個細胞系的克隆形成率時，為每種稀釋度的細胞分別準備3 個培養(yǎng)皿。每個3. 5 cm 培養(yǎng)皿適宜接種的細胞數(shù)是1000、333、111和 37 個。也就是依次 3 倍的稀釋細胞懸液。如果需要加入生長因子、激素或其他添加劑，應(yīng)加在下層的 0.6 % 瓊脂中。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)

下一篇：前列腺上皮

上一篇：分離原代人角膜間質(zhì)細胞

產(chǎn)品中心 Products

亚洲日韩乱码中文无码蜜桃臀,无码人妻久久一区二区三区不卡,把高冷校花压在桌上进进出,国产亚洲精品久久久久久国模美

瓊脂中克隆培養(yǎng)

原理

材料與儀器

步驟

注意事項