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    qPCR中的絕對定量是什么?

    發(fā)布時間: 2021-10-14  點(diǎn)擊次數(shù): 4353次

    絕對定量目的是使用PCR測定目的基因在樣本中的數(shù)量,即拷貝數(shù)。


    在絕對定量中,想要得到目的基因的拷貝數(shù),需要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖需要將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至不同濃度,作為模板進(jìn)行PCR。標(biāo)準(zhǔn)品是已知濃度的模板。


    結(jié)束PCR后,以測得的CT值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。


    對待測樣品的目的基因進(jìn)行檢測時,只需要將得到的CT值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,即可計算出樣品中目的基因的拷貝數(shù)。


    需要注意的是:

    1、標(biāo)準(zhǔn)品必須來源可靠、濃度已知

    2、標(biāo)準(zhǔn)品要和待測樣品要同時在儀器中擴(kuò)增

    3、只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品覆蓋的濃度范圍,進(jìn)行樣品濃度的推測

    qPCR中的絕對定量是什么?

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